专利名称 ---【 一种获得硬叶兰种子萌发有效共生真菌的方法 】

基本信息
申请号
CN201210097484.7
申请日
2012.04.05
公开(公告)号
CN102612965A
公开(公告)日
2012.08.01
申请(专利权)人
中国科学院西双版纳热带植物园
申请人地址
666303 云南省西双版纳傣族自治州勐腊县勐仑镇
发明人
盛春玲;高江云;林华;范旭丽
专利类型
发明专利
摘要
本发明公开了一种获得硬叶兰种子萌发有效共生真菌的方法。利用硬叶兰原生地植株周围的枯枝落叶、树皮、苔藓和腐殖质等作为培养基质,和硬叶兰的种子在实验室进行迁地共生萌发,诱导种子萌发产生原球茎;将获得的原球茎表面灭菌后在无菌条件下用人工培养基培养,诱导原球茎中的内生真菌生长,待长出菌丝时,进行真菌的纯化,获得纯菌落;将获得的真菌和硬叶兰的种子进行共生萌发培养,设置对照实验,以检验所获得的真菌对硬叶兰的种子萌发的有效性,筛选出硬叶兰种子萌发的有效共生真菌,并进行真菌的分子鉴定和保存。本发明操作简单,获得的真菌种类单一,不需要大量繁琐的筛选过程,为利用硬叶兰种子和真菌共生萌发来培育种苗开辟了一条新的途径。
主权项
一种获得硬叶兰种子萌发有效共生真菌的方法,包括以下的步骤:(1)在硬叶兰花期进行人工异交授粉,果实成熟但果荚尚未裂开时收获果实,将种子干燥后用无菌的密闭玻璃容器置于?20℃条件下保存,待用;(2)收集硬叶兰成年植株根部20cm范围内的枯枝落叶、树皮、苔藓和腐殖质制成培养基质,分装在培养皿中,在基质上放置一层无菌尼龙网布,用无菌蒸馏水使培养基质的水分达到饱和,每个培养皿中再放置10块无菌尼龙网片,在每个尼龙网片上均匀播撒硬叶兰种子,将播种好的培养皿放入人工气候箱内进行培养;(3)在培养过程中,每周进行观测,记录种子的萌发情况,当观测到有种子萌发时,记录每一阶段种子或原球茎的数量,培养30~40天后获得原球茎;(4)将获得的原球茎依次用自来水冲洗,次氯酸钠溶液消毒,无菌水漂洗后切成两半,切口面贴于马铃薯葡萄糖培养基PDA上进行培养;(5)原球茎切口处长出菌丝时,用无菌接种针不断地挑取真菌菌落边缘处的菌丝到新的PDA培养基上,转移3~5次后,得到纯菌落;(6)将消毒后的硬叶兰种子放入无菌水中制成均匀的悬浮液,在灭菌后的燕麦琼脂培养基表面放置两张无菌滤纸,分别吸取150微升的种子悬浮液均匀地散布在两张滤纸条上;在培养基中心接种含有不同来源的单一共生真菌纯培养物的琼脂块,同时设置不接菌的对照处理组,每个处理10个重复,用封口膜密封后置于人工气候箱中培养;(7)每周观察1次不同处理的种子,记录种子萌发数量及萌发时间,并 对种子萌发和原球茎发育情况进行分级,记录每一阶段内种子或原球茎的数量,通过和不接菌处理组的对比,筛选出硬叶兰种子萌发的有效共生真菌。

 

IPC信息
IPC主分类号
A01G1/00(2006.01)I
IPC分类号
A01G1/00(2006.01)I;A01G31/00(2006.01)I;A01H4/00(2006.01)I

 

法律状态信息
法律状态公告日
2013.04.10
法律状态
授权 法律状态信息
授权
法律状态公告日
2012.09.26
法律状态
实质审查的生效 法律状态信息
实质审查的生效 IPC(主分类):A01G 1/00 申请日:20120405
法律状态公告日
2012.08.01
法律状态
公开 法律状态信息
公开

 

代理信息
代理机构名称
昆明协立知识产权代理事务所(普通合伙) 53108
代理人姓名
谢嘉
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