专利名称 ---【 一种顺序酶表面共展示系统及其应用 】

基本信息
申请号
CN201410616804.4
申请日
20141105
公开(公告)号
CN105624077B
公开(公告)日
20160601
申请(专利权)人
中国科学院青岛生物能源与过程研究所
申请人地址
266101 山东省青岛市崂山区松岭路189号
发明人
刘爱骅;梁波; 专利类型 发明专利
摘要
本发明涉及生物技术和分析技术领域,具体地说是一种顺序酶按比例细菌表面共展示系统及其应用。顺序酶表面共展示系统为编码目标蛋白糖化酶的基因序列(ga)、葡萄糖脱氢酶突变体的基因序列(gdh‑m)和cohesin‑dockerin蛋白的基因序列(coh‑dock)以及负责跨膜定位和转运的冰核蛋白N端结构域的基因序列inaPb‑N。将所述细菌表面展示系统用于淀粉的检测,本发明对淀粉检测的方法灵敏度高、方法简单。此全细胞催化剂可应用于生物传感、食品工业、医药卫生和生物能源等领域。
主权项
1.一种顺序酶表面共展示系统,其特征在于:顺序酶表面共展示系统由编码目标蛋白糖化酶的基因序列ga、葡萄糖脱氢酶突变体的基因序列gdh-m和cohesin-dockerin蛋白的基因序列coh-dock以及负责跨膜定位和转运的冰核蛋白N端结构域的基因序列inaPb-N组成;所述展示系统为按个数比将编码目标蛋白糖化酶和葡萄糖脱氢酶突变体展示于细菌表面;糖化酶与葡萄糖脱氢酶突变体的个数比为1:1或2:1;所述编码目标蛋白糖化酶的基因序列ga来源于Thermoanaerobacter tengcongensis;编码目标蛋白葡萄糖脱氢酶突变体的基因序列gdh-m来源于枯草芽孢杆菌,突变体的突变位点为Q252L/E170R/V149K/G259A;编码冰核蛋白的基因与编码CohC、CohT两个支架蛋白的基因融合,连接到表达载体pET-28a(+)上,转化至大肠杆菌表达,通过冰核蛋白的锚定作用,将支架蛋白展示在大肠杆菌表面;将糖化酶与DocC蛋白融合、葡萄糖脱氢酶突变体与DocT蛋白融合,在大肠杆菌胞内表达;所述cohesin-dockerin蛋白的基因序列中编码dockerin蛋白的基因是以菌株Clostridium cellulolyticum H10和Clostridium thermocellum ATCC27405的基因组DNA为模板,DocC-F/ DocC-R与DocT–F/ DocT-R为引物,进行PCR扩增,得到编码dockerin蛋白的基因片段docc与doct ,引物是Doc C-F:5’-ACGCGTCGACACAGATCCTGACCCAGTAATTG-3’和Doc C-R:5’-CCGCTCGAGGGTAAGTAAGCTTCCAAGCAAC-3’;Doc T-F:5’-CATGCCATGGACACTAAATTATACGGCGACGTC-3’和Doc T-R:5’-CGCGGATCCGTTCTTGTACGGCAATGTATC-3’;cohesin-dockerin蛋白的基因序列中编码cohesin蛋白的基因是以菌株Clostridium cellulolyticum H10和Clostridium thermocellum ATCC27405的基因组DNA为模板,CohC-F/ CohC-R与CohT-F/ CohT-R为引物,进行PCR扩增,得到编码cohesin蛋白的基因片段cohc与coht ,引物是Coh C-F:5’-ATCCCTGGCGATTCTCTTAAAGCGCGGATCCATCCCTGGCGATTCTCTTAAAG-3’和Coh C-R:5’-TTGAGTACCAGGATCTATAGTTACACATAAGAATGCGGCCGCAGGTGTTGTAGGTGTTGTAGG-3’;Coh T-F:5’-AATGCAACACCGACCAAG-3’和Coh T-R:5’-AGGTGTTGTAGGTGTTGTAGG-3。

 

IPC信息
IPC主分类号
C12N1/21

 

法律状态信息
法律状态公告日
20160601
法律状态
公开 法律状态信息
CN201410616804 20160601 公开 公开
法律状态公告日
20160629
法律状态
实质审查的生效 法律状态信息
CN201410616804 20160629 实质审查的生效 实质审查的生效IPC(主分类):C12N 1/21申请日:20141105
法律状态公告日
20200918
法律状态
授权 法律状态信息
CN201410616804 20200918 授权 授权

 

代理信息
代理机构名称
沈阳科苑专利商标代理有限公司 21002
代理人姓名
周秀梅;李颖


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