专利名称 ---【 一种同步检测百合隐症病毒和斑驳病毒的方法 】

基本信息
申请号
CN201610210090.6
申请日
2016.04.07
公开(公告)号
CN105803113A
公开(公告)日
2016.07.27
申请(专利权)人
中国科学院寒区旱区环境与工程研究所
申请人地址
730000 甘肃省兰州市东岗西路320号
发明人
张玉宝;陈延;王亚军;谢忠奎;王若愚;郭志鸿;杨果; 专利类型 发明专利
摘要
本发明提供了一种免疫捕获双重RT?PCR同步检测百合隐症病毒和百合斑驳病毒的方法,其步骤包括在同一个PCR反应管中用LSV和LMoV的多克隆抗体特异性捕获LSV和LMoV粒子、利用LSV和LMoV的特异性引物进行双重反转录聚合酶链式反应RT?PCR、琼脂糖凝胶电泳检测目的片段;该方法将ELISA和RT?PCR结合,对现有的免疫捕获RT?PCR进行了改进,实现了用免疫捕获RT?PCR同步检测两种百合病毒LSV和LMoV,从而完善了免疫捕获RT?PCR技术。
主权项
一种同步检测百合隐症病毒和斑驳病毒的方法,其特征在于,包括以下步骤:①LSV和LMoV的多克隆抗体被包被在同一个PCR反应管中,捕获LSV和LMoV粒子,具体是用pH9.6的碳酸盐缓冲液将兔抗LMoV和LSV多克隆抗体稀释后混合,使LMoV和LSV两种抗体的终浓度分别为1μg/mL和10μg/mL,取200μL上述稀释的混合抗体加入PCR管;②捕获的LSV和LMoV粒子作为模板,利用LSV?和LMoV?的特异性反向引物LSV?R和LMoV?R以及M?MLV反转录酶进行双重RT,合成LSV和LMoV?两种病毒的cDNAs第一链混合物;③利用②获得的cDNAs为模板,在TaqDNA聚合酶的作用下进行双重PCR;④采用琼脂糖凝胶电泳检测步骤③获得的双重PCR反应产物,LSV和LMoV两种病毒核酸片段的电泳条带分别出现在198bp和395bp处;⑤根据电泳胶上扩增条带的有无及其大小判定所检测的样品是否感染LSV或LMoV,若凝胶中仅存在198bp的核酸片段则说明样品中含有LSV;若凝胶中仅存在395bp的核酸片段则说明样品中含有LMoV;若凝胶中同时存在198bp和395bp的核酸片段,则说明样品中同时含有LSV和LMoV。

 

IPC信息
IPC主分类号
C12Q1/70(2006.01)I
IPC分类号
C12Q1/70(2006.01)I;C12Q1/68(2006.01)I

 

法律状态信息
法律状态公告日
2020.02.18
法律状态
授权 法律状态信息
授权
法律状态公告日
2016.08.24
法律状态
实质审查的生效 法律状态信息
实质审查的生效IPC(主分类):C12Q 1/70
法律状态公告日
2016.07.27
法律状态
公开 法律状态信息
公开

 

代理信息
代理机构名称
代理人姓名

 

被引专利信息
引用阶段 被引时间 专利号 申请人 公开时间
SEA null CN1793858A YUNNAN UNIV OF AGRICULTURE [CN] 20060628
SEA null CN1873019A YUNNAN PROVINCIAL A A S [CN] 20061206
SEA null KR20150145771A REPUBLIC KOREA MAN RURAL DEV [KR] 20151231

 

被引非专利信息
引用阶段 被引时间 被引文档类型 被引文档信息
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