专利名称 ---【 一种兰州百合PR1基因定量检测试剂盒及其检测方法 】

基本信息
申请号
CN201610673491.5
申请日
2016.08.16
公开(公告)号
CN106048067A
公开(公告)日
2016.10.26
申请(专利权)人
中国科学院寒区旱区环境与工程研究所
申请人地址
730000 甘肃省兰州市东岗西路320号
发明人
张玉宝;王亚军;谢忠奎;王乐;王若愚;杨果;郭志鸿;邱阳; 专利类型 发明专利
摘要
一种兰州百合病程相关蛋白PR1基因定量检测的试剂盒及其检测方法,试剂盒主要包括特异性引物、第一链cDNAs合成试剂、荧光定量PCR反应试剂以及阳性对照品和阴性对照品;特异性引物由兰州百合PR1基因和内参18S?rRNA基因的特异性引物组成;阳性对照品为兰州百合PR1基因标准品以及内参18S?rRNA基因标准品;阴性对照品为DEPC水;本发明针对兰州百合PR1基因提供了一种快速、敏感、特异的定量检测试剂盒和检测方法,为兰州百合PR1基因的表达及检测诊断提供了技术支持。
主权项
一种兰州百合PR1基因定量检测试剂盒,包括特异性引物、第一链cDNA合成试剂以及荧光定量PCR反应试剂,所述特异性引物由兰州百合PR1基因和内参18S?rRNA基因的特异性引物组成,所述特异性引物的序列如下:兰州百合PR1基因上游引物P1%:5’? ?GCCACTACACGCAGGTTGTG??3’兰州百合PR1基因下游引物P2%:5’? ?GCCTCTCGCCGACGTAATTC??3’内参18S?rRNA基因上游引物P3%:5’? ?GGGGAAACTTACCAGGTCCA??3’内参18S?rRNA基因下游引物P4%:5’? ?CAGACAAATCGCTCCACCAA? ?3’; 其特征在于所述试剂盒还包括阳性对照品和阴性对照品,所述阳性对照品为兰州百合PR1基因标准品以及内参18S?rRNA基因标准品,所述阴性对照品为DEPC水;所述阳性对照品序列如下:兰州百合PR1基因标准品:gccactacacgcaggt tgtgtggcggagcacccgccgactcggctgcgcaagggt ggt ttgtgacggcggcgatgtgttcatgaactgcaactacgacccgccggggaattacgtcggcgagaggc;内参18S?rRNA基因标准品:ggggaaacttaccaggt ccagacatagtaaggattgacagactgagagctctttcttgattctatgggt ggt ggt gcatggccgttcttagttggt ggagcgatttgtctg;其特征在于将上述阳性对照品序列构建到质粒载体中,测定阳性质粒浓度后换算为拷贝数,然后用双蒸水将上述阳性质粒进行10倍梯度稀释,以10倍系列稀释的阳性质粒溶液作为模板,应用上述特异性引物P1、P2及P3、P4分别进行荧光定量PCR扩增,根据拷贝数的对数值与标准品Ct值的关系可绘制得到PR1基因和18S?rRNA基因的标准曲线;同时将待测样品提取总RNA后进行反转录RT反应,以合成的cDNAs为模板,应用上述特异性引物P1、P2及P3、P4在相同条件下进行荧光定量PCR扩增,测得待测样品cDNAs的Ct值后,对照标准曲线即可获得待测样品起始cDNAs中PR1基因和18S?rRNA基因的精确拷贝数,再经过内参校正后最终获得待测样品PR1基因的标准拷贝数。

 

IPC信息
IPC主分类号
C12Q1/68(2006.01)I
IPC分类号
C12Q1/68(2006.01)I

 

法律状态信息
法律状态公告日
2020.02.18
法律状态
授权 法律状态信息
授权
法律状态公告日
2016.11.23
法律状态
实质审查的生效 法律状态信息
实质审查的生效IPC(主分类):C12Q 1/68
法律状态公告日
2016.10.26
法律状态
公开 法律状态信息
公开

 

代理信息
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被引专利信息
引用阶段 被引时间 专利号 申请人 公开时间

 

被引非专利信息
引用阶段 被引时间 被引文档类型 被引文档信息
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