专利名称 ---【 识别对虾白斑杆状病毒单链抗体的制备方法 】

基本信息
申请号
CN00114500.2
申请日
20000419
公开(公告)号
CN1318564A
公开(公告)日
20011024
申请(专利权)人
中国科学院水生生物研究所
申请人地址
430072湖北省武汉市武昌珞珈山
发明人
戴和平;高宏;赵新颜;戴玲芬;张宪孔; 专利类型 发明专利
摘要
一种识别对虾白斑杆状病毒单链抗体的制备方 法,经分离纯化病毒,将单链抗体基因克隆到噬菌体表达载体,融 合蛋白的形式单链抗体片段由重链和轻链可变区域组成,用一 可弯曲小肽连接成氨基酸单链,其DNA通过PCR技术对mRNA 进行反转录和扩增,克隆到噬菌体表达载体,噬菌体抗体从重组 噬菌体抗体cDNA文库淘选,选择专一识别对虾白斑杆状病毒 的抗体,适用于对虾病毒病的早期检测,通过适合载体,可用于对 虾白斑杆状病毒病的防治。
主权项
1、一种识别对虾白斑杆状病毒单链抗体的制备方法,其特征是, 该方法包括如下步骤: (1)采用蔗糖密度梯度超速离心法,用电镜检测,从感病斑节 对虾的血淋巴液中分离纯化白斑杆状病毒; (2)用蛋白量为20~150μg纯化的完整对虾白斑杆状病毒粒子 注射小鼠,用Titremax佐剂或福氏佐剂或氢氧化铝等常用佐剂,经 17~26天进行二次或三次免疫,再经3~5天用酶联免疫印迹法和 酶联免疫吸附法测定抗体效价,取抗体效价最高的小鼠脾脏,从中 提取mRNA; (3)将此mRNA反转录为cDNA,再用对应于重链和轻链抗体可 变部位DNA的引物通过PCR技术将抗体的重链和轻链的可变片段的 DNA扩增; (4)用一编码可弯曲小肽的DNA小片段将重链和轻链DNA片段 连接起来组成单链抗体DNA,再用对应诊断单链抗体DNA的引物用PCR 技术将整个片段扩增; (5)将单链抗体DNA片段两端的限制性内切酶位点(SfiⅠ和 NotⅠ)酶切,再与具同样酶切位点的噬菌体表达载体连接,电转移 至大肠杆菌中,可获得较高效价的噬菌体抗体cDNA文库; (6)用吸附在朔料管壁上的对虾白斑杆状病毒对上述噬菌体抗 体文库进行1~4次淘选,用酶联免疫吸附法筛选可得到抗原结合 专一性的阳性克隆,该阳性克隆分泌的单链抗体可专一性识别对虾 白斑杆状病毒。

 

IPC信息
IPC主分类号
C07K16/08

 

法律状态信息
法律状态公告日
20100804
法律状态
专利权的终止 法律状态信息
CN00114500 20100804 专利权的终止 未缴年费专利权终止IPC(主分类):C07K 16/08申请日:20000419授权公告日:20050302
法律状态公告日
20010606
法律状态
实质审查请求的生效 法律状态信息
CN00114500 20010606 实质审查请求的生效
法律状态公告日
20050302
法律状态
授权 法律状态信息
CN00114500 20050302 授权 授权
法律状态公告日
20011024
法律状态
公开 法律状态信息
CN00114500 20011024 公开 公开

 

代理信息
代理机构名称
武汉科宏专利事务所
代理人姓名
王敏锋

 

被引专利信息
引用阶段 被引时间 专利号 申请人 公开时间

 

被引非专利信息
引用阶段 被引时间 被引文档类型 被引文档信息
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