专利名称 ---【 一种鲆鲽鱼类受精卵微管骨架免疫荧光染色观察方法 】

基本信息
申请号
CN200510047579.8
申请日
2005.10.28
公开(公告)号
CN1955738
公开(公告)日
2007.05.02
申请(专利权)人
中国科学院海洋研究所
申请人地址
266071山东省青岛市南海路7号
发明人
朱香萍;尤锋;张培军;孙威;徐永立; 专利类型 发明专利
摘要
本发明公开一种鲆鲽鱼类受精卵细胞骨架的免 疫荧光显微观察技术。首先采用改进的固定液对样品进行固 定,然后用解剖针将胚盘从整个胚胎中剥离出来,对样品进行 打孔处理,并用硼氢化钠降低或消除未结合的醛基对实验结果 的影响,再对样品进行间接免疫荧光染色,最后用荧光显微镜 或激光扫描共聚焦显微镜对样品进行观察。该发明的优点是操 作过程简单,结果清晰度高,立体感强,可用于鲆鲽鱼类受精 卵从胚盘形成到2-细胞、4-细胞、8-细胞、16-细胞等发 育时期的微管骨架的动态变化研究,也适用于同属浮性卵、多 卵黄的其它海水鱼类卵的免疫组化研究中,其适用范围广泛。
主权项
1、一种鲆鲽鱼类受精卵微管骨架免疫荧光染色和显微观察方法,其特 征在于包括步骤如下: ①采用改进的哌嗪-N,N’-双2-乙烷磺酸配制的甲醛-戊二醛固定液对样 品进行固定,受精卵在该固定液中室温下抚育3-6小时,磷酸吐温缓冲溶 液清洗,然后在磷酸吐温缓冲溶液中于4℃下保存,待用; ②在解剖镜下挑选出发育状态正常的受精卵,并用解剖针将胚盘从整个 受精卵中剥离出来; ③在常温下用浓度百分比为1-2%的Triton-100对样品进行打孔处理,再 在含有80-200mM?NaBH4的磷酸盐缓冲液中,室温下抚育6-16小时; 其中:磷酸盐缓冲液成分为128mM?NaCl,2mM?KCl,8mM?NaH2PO4,2mM KH2PO4,pH?7.2-7.4; ④采用改进的间接免疫荧光染色步骤对样品进行染色,其中:抚育抗体 前非特异结合位点不封闭;抚育一抗过夜,抚育二抗为避光2-4小时;清洗 液为含有155mM?NaCl、10mM?Tris-Cl、pH为7.2-7.4的Tris盐酸缓冲液, 及诺纳德P-40,其中诺纳德P-40占Tris盐酸缓冲液浓度百分比的0.1-0.2%; 抗体稀释液含有浓度百分比为10%的山羊血清和5%的二甲亚砜的Tris盐酸缓 冲液; ⑤用荧光显微镜或激光扫描共聚焦显微镜进行观察。

 

IPC信息
IPC主分类号
G01N33/577(2006.01)
IPC分类号
G01N33/577(2006.01);G01N21/76(2006.01);G01N1/28(2006.01);C12N1/00(2006.01);C12M1/00(2006.01)

 

法律状态信息
法律状态公告日
2015.12.16
法律状态
专利权的终止 法律状态信息
未缴年费专利权终止 IPC(主分类):G01N 33/577 申请日:20051028 授权公告日:20120111 终止日期:20141028
法律状态公告日
2012.01.11
法律状态
授权 法律状态信息
授权
法律状态公告日
2007.06.27
法律状态
实质审查的生效 法律状态信息
实质审查的生效
法律状态公告日
2007.05.02
法律状态
公开 法律状态信息
公开

 

代理信息
代理机构名称
沈阳科苑专利商标代理有限公司
代理人姓名
许宗富;周秀梅

 

被引专利信息
引用阶段 被引时间 专利号 申请人 公开时间

 

被引非专利信息
引用阶段 被引时间 被引文档类型 被引文档信息
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