专利名称 ---【 一种利用秸秆细胞壁蛋白构建的高效纤维素酶解体系 】

基本信息
申请号
CN200710176768.4
申请日
2007.11.02
公开(公告)号
CN101423853
公开(公告)日
2009.05.06
申请(专利权)人
中国科学院过程工程研究所
申请人地址
100080北京市海淀区中关村北二条1号
发明人
陈洪章;韩业君; 专利类型 发明专利
摘要
本发明提供了一种利用秸秆细胞壁蛋白构建高效纤维素酶系的方法及 其在木质纤维素降解中的应用。以秸秆为原料,利用秸秆细胞壁中的植物内 源性纤维素酶以及与纤维素酶具有协同作用的蛋白,构建了新型纤维素酶解 体系。蛋白Zea 1能够通过打断底物中的氢键,提高纤维素酶的可及性;蛋 白Zea 2能够改变木质素的结构,减少木质素对纤维素酶的无效吸附。木聚 糖酶和果胶酶能够酶解非纤维素组分,提高纤维素的可及性。在木质纤维素 的酶解中,添加秸秆细胞壁蛋白不仅能够大幅度提高纤维素的转化率,还能 够降低纤维素酶添加量,达到了利用秸秆自身资源促进纤维素降解的目的。
主权项
1. 一种利用秸秆细胞壁蛋白构建的高效纤维素酶解体系,其特征包括以 下步骤: 1)秸秆细胞壁总蛋白的提取:将秸秆置于1-2倍体积的研磨缓冲液中研 磨,过滤后滤渣置于提取缓冲液中,然后过滤,液体即为细胞壁总蛋 白,包括具有氢键断裂作用的蛋白Zea1、具有改变木质素结构的蛋 白Zea2、(1,3),(1,4)-β-葡聚糖外切酶、β-葡萄糖苷酶、β-葡聚糖内 切酶、木聚糖酶和果胶酶; 2)蛋白Zea1、Zea2的分离、纯化:将1)中得到的细胞壁总蛋白进行 硫酸铵沉淀、DEAE-琼脂糖和葡聚糖G-75层析,得到蛋白Zea1,分 子量为57.6kDa;将1)中得到的粗细胞壁蛋白进行硫酸铵沉淀、 Phenyl-Superose HR5/5和葡聚糖G-75层析,得到蛋白Zea2,分子量 为39.6kDa; 3)利用细胞壁总蛋白酶解纯纤维素:酶解在醋酸缓冲液(pH4.5)中, 35-50℃下进行;在酶解体系中,每克底物加入1-2毫克粗细胞壁蛋 白和10-30FPU木霉纤维素酶; 4)利用蛋白Zea1酶解纯纤维素:酶解在醋酸缓冲液(pH4.5)中,35-50℃ 下进行;在酶解体系中,每克底物加入100-200微克Zea1和10-30FPU 纤维素酶; 5)利用细胞壁总蛋白酶解木质纤维素:酶解在醋酸缓冲液(pH4.5)中, 35-50℃下进行;在酶解体系中,每克底物加入3-5毫克粗细胞壁蛋 白和10-30FPU纤维素酶; 6)利用蛋白Zea1、Zea2酶解木质纤维素:酶解在醋酸缓冲液(pH4.5) 中,50℃下进行;在酶解体系中,每克底物分别加入200-300微克 Zea1、500-700微克Zea2和10-30FPU纤维素酶。

 

IPC信息
IPC主分类号
C12P19/00(2006.01)I
IPC分类号
C12P19/00(2006.01)I

 

法律状态信息
法律状态公告日
2012.02.15
法律状态
发明专利申请公布后的驳回 法律状态信息
发明专利申请公布后的驳回 IPC(主分类):C12P 19/00 公开日:20090506
法律状态公告日
2009.08.12
法律状态
实质审查的生效 法律状态信息
实质审查的生效
法律状态公告日
2009.05.06
法律状态
公开 法律状态信息
公开

 

代理信息
代理机构名称
代理人姓名

 

被引专利信息
引用阶段 被引时间 专利号 申请人 公开时间

 

被引非专利信息
引用阶段 被引时间 被引文档类型 被引文档信息
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